2015년도 2학기 실험동물의학 실습 강의자료
(마우스 기초기술)
	실시일 :	2015년 10월 16일 ~
	작성자 :	충북대학교 실험동물연구지원센터

1. 실험동물의 취급 및 보정

실험자 및 사육자는 동물에게 고통을 주지 않고 취급할 수 있어야 한다. 이를 위하여 동물에 애정을 가지고 접촉하고 도망가지 않도록 배려함과 동시에 용기를 가지고 다루는 것이 중요하다. 설치류는 야행성이기 때문에 낮에는 잠을 자거나 잘 움직이지 않는다. 작업 시 스트레스나 놀라지 않게 주의하여야 한다. 실험자나 사육자 자신의 감염이나 상처를 방지하기 위하여 장갑을 착용하며, 알레르기 방지를 위하여 마스크를 착용한다.

가. 마우스의 취급 및 보정

실험에 사용하는 마우스는 동물실에서 반입할 때부터 올바른 취급을 해야 한다. 동물을 다룰 때의 기본은

① 동물에 대한 애정을 가지고 접하는 것

② 용기를 가지고 다루는 것

③ 어떤 상황이 발생하더라도 대처할 수 있는 방어방법을 익혀두는 것이다.

처음 동물을 취급할 때에는 어떤 동물을 좋아한다 해도 다소의 공포심이 생긴다. 동물의 관점에서도 마찬가지로 사람을 접하게 될 때 어느 정도 불안감, 경계심 등을 갖게 되므로 불안감과 경계심을 없애기 위해 소리를 지르는 경우가 있기 때문에 부드럽게 몸을 만지는 등의 행동을 통하여, 동물에 대하여 배려를 하고 용기를 가지고 다루는 것이 좋다. 손으로 잡은 다음 동물이 싫어하지 않게 하거나 불안정한 상황에서 빨리 안정된 상태가 되도록 한다. 부득이 하게 동물이 싫어하는 방법으로 다룰 때에는 물리지 않도록 주의한다.

마우스의 케이지로부터 다른 케이지로 이송 등 단기간 이송은 주로 꼬리를 잡고 이송할 수 있다. 관찰 시에는 한 손으로 들고 관찰하는 경우도 있다. 어린 동물은 두 손바닥에 놓고 관찰하는 경우도 있다. Barrier에서 사육하는 동물은 핀셋을 이용하여 꼬리를 잡고 이송하는 경우도 있으며, 어린 동물은 경부를 잡아 이송할 수도 있다.

마우스에 약물을 투여하거나 혈액을 채취하고자 할 때는 마우스가 움직이지 않도록 보정을 잘 해야 한다. 먼저 케이지 뚜껑위에 마우스를 올려놓고 한 손으로 꼬리를 잡아당긴 다음 다른 손으로 목과 어깨 부위의 피부를 엄지손가락과 집게손가락을 이용하여 움켜잡는다. 마우스를 움켜잡은 다음 꼬리를 마우스를 잡고 있는 쪽의 새끼손가락 사이에 끼운다. 마우스 경부가 좌우로 움직이지 않도록 하는 것이 중요하다.

꼬리 2/3 아래에서 잡는다. 장기간 꼬리를 들고 있지 않는다.	목덜미를 잡고 이송
유리비이커를 이용하여 동물을 이송	두손으로 동물을 이송
<그림 1-1> 마우스 케이지 교환 혹은 관찰시 보정 • 이송방법

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<그림 1-2> 두손을 이용한 마우스 보정 순서

2. 투여법

약물의 투여방법은 대부분의 설치류에서 비슷하다. 적절한 보정과 마취는 동물이나 실험자의 상해를 방지하거나 동물의 고통을 줄이기 위하여 필요하다.

가. 경구투여 (oral administration)

사료나 음수에 시료를 혼합하여 투여하는 경우도 있으나, 정확하게 소정량을 위장안으로 투여하기 위해서는 존데를 사용한다,

존데는 마우스용 및 랫드용이 시판되고 있으므로, 각각의 동물에 적합한 것을 사용하여야 한다.

◈ 마우스

◉ 준비물품 : 1ml 일회용주사기,  금속제 존데

◉ 방법

1) 금속제 존데를 준비한다.

2) 1 ml 주사기의 주사침을 제거하고 존데를 끼어 넣는다.

3) 투여할 용액을 정해진 양만큼 존데를 끼운 주사기에 넣어 준비한다.

4) 1 ml 주사기의 피스톤을 아래로 하여 주사기를 잡고 주사기를 가볍게 두드려 주사기 선단에 공기를 모으고, 주사기로부터 공기를 빼낸다.

5) 케이지의 뚜껑 혹은 테이블 위에서 마우스가 앞으로 전진 하게끔 꼬리를 가볍게 당긴다.

6) 왼손의 엄지와 검지로 양 귀쪽의 뒷목의 피부를 잡아 보정한다.

7) 보정하였을 때 몸이 길게 펴지고 머리가 고정되었을 때 투여가 가능하다.

8) 목 부분의 피부를 심하게 잡았을 경우 질식하여 사망하는 경우가 있으므로 주의한다.

9) 오른쪽 손의 손가락과 손바닥으로 주사기를 잡고, 엄지와 검지로 주사기의 선단을 잡는다.

10) 존데의 선단을 보정한 마우스의 구강내에 넣는다. 존데가 마우스 이빨에 물리지 않게 이빨의 오른쪽으로 존데를 넣는다.

11) 존데를 동물의 몸과 평행이 되도록 하면 식도에 들어가므로 그대로 존데를 밀어 넣는 것이 가능해진다. 이때 미끄러지듯이 들어가지 않고 걸림이 느껴진다면 기관으로 들어간 것이므로 힘을 가해 밀어 넣으면 안 된다.

12) 보통 입에서부터 위까지의 길이는 존데의 길이 2/3정도이므로 존데의 2/3가 들어간다. 식도에 들어간 후에도 저항이 느껴지는 경우에는 존데를 빼어 다시 시작한다. 그렇지 않을 경우 식도에 구멍이 나서 동물을 사망시키는 경우도 있다.

13) 음압이 걸리는지 확인하고 주사기의 내관을 밀어 투여한다. 이때 용액이 입이나 코에서 액체가 나오면 식도에 유착이 된 것이므로 존데를 빼고 물질을 탈지면으로 제거 한후 처음부터 다시 한다.

14) 투여가 끝난 후에는 존데를 신속하고 부드럽게 빼고 동물을 케이지에 돌려 넣는다.

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<그림 2-1> 마우스 경구투여 순서

나. 피하주사 (subcutaneous [SC] injection)

피하투여는 진피와 근육사이에 있는 피하조직에 시료를 주입하는 투여하는 방법이다.

주로 경배부에 행한다. 이 부위는 동물에 자극을 적게 주며 투여하기에 쉬운 부위이다.

◉ 준비물품 : 1 ml 일회용주사기, 70% 알코올솜

◉ 투여방법

1) 투여할 용액을 주사기에 정해진 양만큼 넣어 준비한다.

2) 케이지 뚜껑 위에 동물을 놓고 왼손의 엄지와 검지를 이용하여 양 귀쪽 뒷목의 피부를 삼각형의 텐트 모양으로 보정한다.

3) 알코올솜으로 소독한 후 삼각형 중앙에 등과 평행하게 주사침을 꽂는다.

4) 보정된 왼손의 엄지와 검지 사이의 피하에 주사침이 꽂아 졌는지 감지한다.

약물의 양은 마우스의 경우 0.3 ml, 랫드의 경우 2 ml를 넘지 않도록 조절해야 하며, 1.5 ml 이상의 약물을 주입하고자 할 때는 절반을 주입한 후 바늘의 방향을 약 45° 정도 바꾸어 나머지 약물을 위치가 다르게 주입하거나, 아예 바늘을 뽑은 다음 절반을 다른 부위에 주사한다.

5) 주사기 내관을 당겨 혈액이 주사기내로 들어오지 않는 것을 확인한 후 용액을 투여한다. 만약 주사기 내에 혈액이 들어오면 바늘을 빼서 다시 시작한다.

6) 투여한 용액이 세지 않게 왼손의 엄지와 검지로 주사침으로 난 피하조직의 구멍을 잡아주면서 주사기를 뺀다. 이때 투여 부위로 물질이 나오지 않도록 3~5초간 피하조직을 잡아준다.

7) 주사침을 피하에 넣은 후에 좌우로 움직이면 혈관 또는 다른 조직을 상하게 하므로 주의해야한다.

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<그림 2-2> 마우스 피하투여 순서

다. 복강내투여 (intraperitoneal [IP] injection)

복강내 투여는 마우스, 랫드와 같은 소형동물에 있어서 가장 빈번하게 이용되는 방법이다, 그러나 이 투여법은  투여 실수의 발생사례가 빈번히 보고되어 있으므로 실시에 있어서는 세심한 주의가 필요하다. 주사침을 삽입할 때에는 먼저 주사침을 피부와 수평이 되도록 피하로 약 1 cm 정도 삽입한 후 주사기를 45°로 들어 복막을 관통시킨다. 이 때 “뽁”하는 느낌을 받을 수 있다. 결과적으로 주사침의 끝 1 cm 정도만이 복강 내로 삽입되도록 한다. 이와 같은 2단계 주사법은 주사침에 의한 내부장기의 손상을 막아줌은 물론 주사액이 주사부위로 되돌아 나오는 것을 방지해 준다.

◉ 준비물품: 1 ml, 3 ml일회용주사기, 70% 알코올솜

1) 투여할 용액을 주사기에 정해진 양만큼 넣어 준비한다.

2) 왼손의 엄지와 검지는 양 귀쪽 뒷목의 피부를 잡고 나머지 손가락은 몸통의 피부를 잡아 보정한다.

3) 알코올솜을 이용해 복부를 소독한다.

4) 투여부위는 복부 정중선을 중심으로 대퇴부분에 있는 복부 좌우에 투여한다.

5) 복부에 평행하게 피하에 주사침을 5 mm 정도 찌른 뒤, 주사침을 45℃정도 세워서 복강내로 찌른다.

6) 주사기에 혈액이나 장관내용물이 빨리지 않는 것을 확인한 후 용액을 투여한다.

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<그림 2-3> 마우스 복강투여 순서

라. 근육내주사 (intramuscular [IM] injection)

마우스와 랫드같은 동물에서는 투여부위로 대퇴사두근(대퇴직근, 외측광근. 내측광근, 중간광근으로구성)이 자주 이용된다. 이외에 대퇴부에 있는 대퇴이두근, 반건양근, 하퇴부의 비복근, 둔부의 천둔근 등이 이용된다. 주사바늘은 1/5 X 27-30G, 주사기는 0.5 ml 정도가 적당하다. 정확한 근육내 주사를 하기 위해서는 2명의 실험자 필요하다.

◉ 준비물품: 1 ml 일회용주사기, 70% 알코올솜

◉ 투여방법

1) 투여할 용액을 주사기에 정해진 양만큼 넣어 준비한다.

2) 보정자가 왼손을 이용하여 복강투여와 같은 방법으로 보정한다.

3) 실험자는 투여할 용액을 주사기에 정해진 양만큼 넣어 준비한다.

4) 근육 내 주사는 뒷다리 대퇴부에 실시한다.

5) 왼쪽과 오른쪽 중 원하는 대퇴부분의 동물의 발목을 잡아 실험자 쪽으로 잡아당긴다.

6) 알코올솜으로 소독한 후 주사침은 피부표면에 수직으로 약 1 mm정도 깊게 찌른다.

7) 피스톤을 잡아 당겨 바늘이 혈관 내에 들어있지 않은 것을 확인하고, 주사기의 피스톤을 천천히 밀어서 용액을 투여한다.

<그림 2-4> 마우스의 근육주사에 이용하는 근육 및 주사법

마. 정맥내주사 (intravenous [IV] injection)

마우스와 랫드에서 정맥주사를 위해서는 여러 가지 정맥을 이용할 수 있다. 어떤 정맥을 이용할 것인지는 실험자의 선호도에 따라 달라진다. 정맥내주사에 있어서 몇 가지 일반적인 요점을 숙지하고 있어야 한다. 먼저 주사침이 정맥내에 정확하게 삽입되었는지를 확인할 수 있어야 한다. 즉 주사침이 정맥내로 삽입되었을 때는 주사기 내에 혈액이 소량 흘러들어오는 것을 확인할 수 있으며, 그래도 의심이 된다면 약액을 소량 주입하여 수포의 형성 유무를 보고 확인하면 된다. 또한 실험자는 약물의 투여가 1회성인지 아니면 연속적인지를 숙지하고 있어야 한다. 1회성인 경우는 문제가 되지 않지만 장기간에 걸쳐 수차례 약물을 투여한다면 처음에는 심장으로부터 먼 부위에서 실시하고 그 다음은 좀 더 가까운 부위에서 진행성으로 실시하면 된다. 만약 처음 약물을 투여할 때 심장과 가장 가까운 부위에서 실시하여 정맥에 문제가 발생했다면 정맥혈은 심장을 향해 흐르기 때문에 문제가 되는 삽입부위 이후의 혈관은 사용할 수 없게 된다.

1) 꼬리정맥주사 (caudal vein injection)

꼬리에는 4개의 혈관이 위치해 있는데 그 중 측면에 있는 두개의 정맥을 이용한다. 미정맥주사는 상당히 어려운 기술이기 때문에 보정틀이 필요하다. 보통 25 - 26 G 주사침을 사용하며, 정맥이 피하 바로 밑에 있기 때문에 얕은 각도로 삽입되어야 한다. 정맥 내로 주사침이 정확하게 삽입되었는지 확인하기 위해 피스톤을 약간 잡아당겨 음압을 가하면 혈액이 주사기 내로 들어오는 것을 볼 수 있다. 약물을 주입할 때 수포가 형성되지 않고 쉽게 들어가면 정맥 내에 정확하게 삽입된 것이다. 만약 첫 번째 시도에서 실패했다면 처음 시도되었던 부위에서 앞쪽으로 전진하여 재차 시도한다.

투여하는 정맥은 동물종에 따라 달라진다. 마우스와 랫드에서는 주로 미정맥에 투여한다.

◉ 준비물품: 1 ml 일회용주사기, 70% 알코올솜, 보정틀, 탈지면

◉ 투여방법

1) 미정맥을 확장시키기 위해서 투여할 동물을 따뜻하게 해준다.

2) 투여할 용액을 주사기에 정해진 양만큼 넣어 준비한다.

3) 미정맥의 경우 각각 동물종에 맞는 보정틀을 이용하여 보정한다.

4) 꼬리를 알코올솜을 이용하여 소독한다. 꼬리의 표면은 꼬리끝 부분을 향해서 비닐상으로 되어 있기 때문에 이것이 역행하여 문지르기 않도록 한다.

5) 투여는 꼬리의 끝 부분 근처부터 시작한다.

6) 투여부위는 꼬리끝에서 1/3~1/4 위치에서 좌우의 한쪽의 정맥에 주사침을 넣어 주사기의 피스톤을 당겨 혈액이 들어오는 것을 확인한 후 용액을 투여한다.

7) 투여 후 주사기를 신속하게 빼고 탈지면을 이용하여 눌러 압박 지혈시킨다.

<그림 2-5> 마우스의 꼬리정맥주사법

2) 목정맥주사 (jugular vein injection)

◈ 마우스나 랫드

◉ 준비물품: 1~3 ml 일회용주사기, 70% 알코올솜

◉ 투여방법

1) 주사하고자 하는 동물의 꼬리가 실험자를 향하도록 하여 앙와위로 보정한다.

2) 목의 중심부에 피부 절개창을 만든다.

3) 어린동물에서는 경정맥은 쉽게 찾을 수 있으나 나이 든 동물에서는 지방조직 때문에 찾기가 어려운데, 이때는 지방과 결합조직을 둔성 분리하여 제거한다.

4) 둔성 분리 도중 정맥에 영향을 주면 정맥이 수축하는 성질이 있기 때문에 이런 경우는 손을 대지 않고 그대로 두면 원래대로 회복된다.

5) 약물을 주입하기 위해서 25 G 주사침을 가슴근을 통하여 10°의 각도로 정맥내로 삽입한다.

6) 주사기의 피스톤을 약간 후퇴하여 혈액이 관찰되면 정맥내로 정확하게 삽입된 것이다.

7) 약물을 주입하고 나서 주사기를 제거했을 때 가슴근을 통하여 주사침을 삽입시켰기 때문에 출혈은 거의 없다.

<그림 2-6> 마우스의 목정맥주사법

바. 피내주사 (intradermal [ID] injection)

피내주사는 Tuberculin 반응 등 면역 알러지 시험에 많이 사용되는 방법이다. 피내주사에 주로 이용되는 부위는 등, 상복부, 꼬리 기시부 및 뒷발바닥 표면이다. 먼저 제모기나 제모제를 이용하여 털을 제거한다. 피내주사시 사용되는 주사침은 특별히 고안된 Shick 주사침을 사용하지만 27 - 25 G 일반 주사침으로도 충분하다. 주사할 부위 좌우의 피부가 주사시 밀려나지 않도록 한 손으로 피부를 고정하고 주사침을 피부의 표면과 거의 수평으로 3 - 5 mm 삽입시킨다. 주사침이 피내에 삽입되면 주사침이 통과하는 데에 저항감을 느끼게 된다. 피내주사액량은 동물의 크기와 상관없이 0.05 - 0.3 ml/animal이지만 단단한 피부조직 속에 주사되므로 수포가 형성되며, 주사시 수포가 형성되지 않으면 피하에 주입된 것이므로 다른 부위로 자리를 옮겨야 한다. <그림 2-7>처럼 유색 약물을 주입하면 색을 볼 수 있으며, 무색 약물인 경우에는 피부가 하얗게 탈색되는 듯한 느낌을 준다.

◈ 준비물품 : 1 ml 일회용주사기, 제모기

◉ 투여방법

1) 보정자가 앞다리와 뒷다리 잡아 보정하여 등이 길게 펴지게 한다.

2) 실험자가 동물의 등부분의 털을 결의 반대 방향으로 제모한다.

3) 실험자는 투여할 용액을 주사기에 정해진 양만큼 넣어 준비한다.

4) 제모한 등에 투여하고자하는 곳에 네임펜을 이용하여 점을 찍어둔다.

5) 표시한 점에 주사침을 등과 평행하게 피내에 넣어 용액을 투여한다.

6) 주사기에 내용물을 주입하기 전에 바늘이 혈관 내에 들어 있지 않은 것을 확인하기 위해서 피스톤을 당겨본다.

7) 용액을 투여하면 피부가 표시한 점을 중심으로 원모양으로 부어오르게 된다.

<그림 2-7> 피내주사법

3. 채혈법

동물로부터의 혈액, 뇨 및 변의 채취는 혈액학 및 혈액생화학적 성상을 조사하여 동물의 건강상태를 파악하는 것뿐만이 아니라 약물의 생체에서의 흡수, 분포, 대사 및 배설에 대한 다양한 정보를 얻기 위한 절차로, 특히 실험동물을 이용한 시험에서는 정교한 숙련도가 요구된다. 채혈법으로는 동물을 희생시키면서 다량의 혈액을 얻기 위한 전채혈법과 동물을 죽이지 않고 경시별로 연속하여 소량의 혈액을 채취하는 부분채혈법이 있다. 마우스와 랫드는 일반적으로 부분채혈시 미정맥 채혈법과 안와정맥총 채혈법, 목정맥 채혈법이 이용되고, 전채혈시는 배대동맥 채혈법, 배대정맥 채혈법, 심장 채혈법 등이 일반적으로 행해지고 있다. 토끼는 일반적으로 부분채혈시 이개정ㆍ동맥 채혈법이 이용되고, 전채혈시는 심장 채혈법이 일반적으로 행해지고 있다. 개는 일반적으로 부분채혈을 실시하며 경정맥 채혈법, 요측피 채혈법으로 채혈하며 전채혈은 거의 이용하지 않는다. 채혈할 때에는 채혈부위, 채혈방법, 절식시간, 채혈시간이 검사치에 영향을 미치므로 사전에 시험목적에 맞도록 계획하는 것이 바람직하다. 채혈에 따라 일과성의 실현성 빈혈을 없애기 위해서 채혈량과 채혈의 간격에 충분한 배려가 필요하며, 생리적 동요에 미치지 않는 최대 채혈량은 전혈량의 10%이다. 반복 채혈시에는 지혈 소독에 유의한다.

1) 절식시간은 동물종에 맞춰서 선택하는데, 비설치류에서는 24시간을 넘지 않는 범위에서의 절식을 권하고 있다.

2) 랫드에서는 하룻밤, 즉 12 - 16시간의 절식이 적당하다.

3) 마우스처럼 대사속도가 빠른 동물종에서는 보다 단시간의 절식이 좋다. 일반적으로 마우스에서는 3 - 4시간의 절식으로 충분하다고 생각되고 있다.

가. 안와정맥얼기채혈 (intraorbital blood collection)

마우스, 랫드. 기니픽 등의 소동물에 주로 응용되는 채혈법으로 Retro-orbital plexus를 통한 채혈은 눈 뒤쪽에 큰 혈관이나 신경얼기를 가진 설치류에서 제한적으로 행해지는데, 동물의 희생없이 연속채혈이 가능한 채혈법이다.

◉ 준비물품

에테르(Ether), 마취통, 유리모세관(헤마토크리트관), 탈지면, 마이크로튜브, 튜브 랙

※유리모세관사양 : Lnength : 75 mm, O.D : 1.47 mm, I.D : 0.56 mm

◉ 채혈방법

1) 마취통에 에테르를 넣는다.

2) 랫드를 마취통에 넣고 마취를 시키는 도중 마취통을 흔들어봐서 랫드가 균형을 유지 못하고 눈이 깜빡거리지 않으면 적당한 상태로 보고 꺼낸다.

3) 검지는 하악부분에 위치한 상태에서 엄지로 두개골의 피부를 끌어당겨 랫드의 안구가 돌출 되도록 보정한 후 나머지 손가락으로 몸통의 피부를 잡아 준다.

4) 유리모세관을 하안검 내측에 유리모세관을 삽입하여 안와정맥얼기을 파열시켜 혈액이 유리모세관을 통하여 흘러 나오게 한다.

5) 이물질이 혼입되므로 처음 1 - 2 방울은 버리고 다음 혈액부터 마이크로 튜브에 필요한 량의 혈액을 받는다.

6) 혈액을 채취한 후 유리모세관을 제거한 후 탈지면으로 지혈을 해준다.

7) 채혈량은 마우스에서는 0.5 - 0.8 ml, 랫드는 3 - 5 ml 정도이다.

◉ 주의사항

1) 지혈을 할때 목부위를 압박하면 혈액이 계속 나오므로 지혈이 되지 않는다.

2) 채혈하는 과정에서 시신경을 건드리지 않도록 숙련을 해야 한다.

3) 이 채혈법은 일반적으로 동물이 마취되어 있는 상태에서 이루어져야한다.

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<그림 3-1> 마우스의 안와정맥얼기 채혈법

나. 꼬리정맥채혈 (Tail vein blood collection)

마우스, 랫드 등의 설치류에 주로 이용되는 채혈법으로 혈액학적 지표의 변화가 생기는 단점이 있으나 무마취로 연속채혈이 가능한 채혈법이다.

◉ 준비물품

삽입관 끝부분이 절개된 카테터(22~24 G), 탈지면, 70% 알코올솜, 마이크로 튜브(헤파린처리), 튜브 랙, 보정틀

◉ 채혈방법

1) 마우스 또는 랫드를 보정틀에 넣어 보정한 후 꼬리의 좌, 우측의 정맥을 확인한다.

2) 70% 알콜솜을 이용하여 꼬리 윗 부분에서 아래부분으로 잘 닦는다.

3) 꼬리의 채혈 위치를 선정한 후 카테터를 주사침과 같이 정맥에 삽입한다.

4) 정맥내에 카테터가 삽입되면 주사침을 제거한다.

5) 카테터에서 나오는 혈액을 마이크로 튜브로 필요한 량의 혈액을 받는다.

6) 혈액채취후 카테터를 찌른 윗부분의 꼬리를 눌러 혈액이 나오지 않도록 한다.

7) 마이크로 튜브를 닫고 헤파린과 잘 혼합되도록 마이크로 튜브를 흔들어 주고, 마이크로튜브 랙에 넣은후 카테터를 제거한 후 채혈 부위를 압박하여 지혈한다.

◉ 주의사항

1) 보정틀이 작을 경우 보정틀에 랫드를 넣을때 너무 압박되지 않도록 주의

(심하면 질식으로 죽을수도 있음)

<그림 3-2> 설치류의 꼬리단면

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<그림 3-3> 마우스의 꼬리정맥 채혈

다. 배대정ㆍ동맥 채혈 (Abdominal veinㆍaorta blood collection)

1) 배대정맥 채혈(Abdominal vein blood collection)

◉ 준비물품

마취통, 에테르(Ether), 일회용주사기, 혈액채취 시험관, 70% 알코올솜

◉ 채혈방법

1) 마취통에 에테르를 넣는다.

2) 동물을 마취통에 넣고 마취를 시키는 도중 마취통을 흔들어봐서 동물이 균형을 유지 못하고 눈이 깜빡거리지 않으면 적당한 마취상태로 판단하고 꺼낸다.

3) 동물을 보정판에 배아위(Dorsal positio)로 하여 고정한 후 보조 마취기를 이용하여 채혈시 마취가 유지되도록 한다.

4) 외요도구의 상부로부터 검상돌기까지의 피부와 복근을 동시에 절개하고 최후늑골을 따라서 피부와 복근을 좌우로 자른다. 이때 혈관을 자르지 않도록 주의한다.

5) 장 전체를 우측으로 제쳐 놓고 몸의 중앙부에 보이는 지방조직을 탈지면이나 tissue를 양손에 쥐고 좌우로 분리시키면 암적색의 후대정맥이 보인다.

6) 마우스에서는 23 - 24 G, 랫드나 기니픽에서는 22 G의 주사침을 장착한 주사기를 신정맥의 후방 5 - 10 mm 부위로부터 전방을 향하여 채혈한다.

7) 주사기의 피스톤을 세게 당기면 정맥이 주사침의 입구를 막게 되므로 혈관내의 혈액량 과 주사침의 상태를 확인하면서 서서히 당긴다.

8) 필요한 혈액이 얻어지면 동물에서 주사바늘을 빼고 주사바늘을 떼어 혈액채취 시험관에 혈액을 넣는다.

◉ 주의사항

1) 개복시 과잉 출혈 및 장기가 손상되지 않도록 한다.

2) 보조마취시 동물이 사망하지 않도록 동물의 상태를 확인하며 채혈을 실시한다.

2) 배대동맥채혈 (Abdominal aorta blood collection)

◉ 준비물품

마취통, 에테르(Ether), 일회용주사기, 혈액채취 시험관, 70% 알코올솜

◉ 채혈방법

1) 동물 마취, 고정, 개복까지는 배대정맥채혈과 동일하다.

2) 지방조직을 분리하여 정맥이 보이면 정맥의 좌측 (동물기준)으로 달리고 있는 백색의 배대동맥을 볼 수 있다. 신동맥으로부터 골반부 쪽으로 조심하여 주위의 지방조직과 분리한다.

3) 주사기를 대동맥이 좌우 장골동맥으로 분리되는 부위에 삽입 하기전에 주사침 끝의 단면이 아래를 향하고 있는지 확인 후 동맥에 주사침을 삽입한뒤 주사기의 피스톤을 세게 당기면 정맥이 주사침의 입구를 막게 되므로 혈관내의 혈액량 과 주사침의 상태를 확인하면서 서서히 당긴다.

4) 필요한 혈액이 얻어지면 동물에서 주사바늘을 빼고 주사바늘을 떼어 혈액채취 시험관에 혈액을 넣는다.

5) 랫드나 기니픽에서는 실리콘 튜브를 연결한 18 - 19 G의 채혈침을 동맥에 삽입하여 유출되는 혈액을 시험관 등에 받기도 한다.

6) 채혈량은 마우스에서 0.5 - 1 ml, 랫드에서는 5 - 8 ml 정도이다.

◉ 주의사항

1) 주사침 끝의 단면이 아래 (동물의 등쪽)를 향하도록 함으로써 삽입시 분출되는 혈액이 시험자에게 튀지 않도록 주의한다

<그림 3-4> 마우스의 배대정맥채혈법

라. 심장채혈 (Cardiac puncture)

◈ 마우스 및 랫드

◉ 준비물품

마취통, 에테르(Ether), 일회용주사기, 혈액채취 시험관, 70% 알코올솜

◉ 채혈방법

1) 마취통에 에테르를 넣는다.

2) 동물을 마취통에 넣고 마취를 시키는 도중 마취통을 흔들어봐서 동물이 균형을 유지 못하고 눈이 깜빡거리지 않으면 적당한 마취상태로 판단하고 꺼낸다.

3) 마취한 동물을 시험자의 몸으로부터 조금 떨어진 위치에 눕힌다.

4) 마우스에서는 24 - 25 G, 랫드에서는 22 - 23 G의 주사침의 공기를 모두 빼고 나서 채혈할 동물의 심장을 촉진하여 예측한 심장의 위치에 대고 늑간골사이로 찌른다.

5) 심장의 좌심실을 겨냥하여 흉강에 손을 얹고 동시에 주사기 밑부분을 다른쪽 손으로 완전히 잡고 주사기의 내관을 천천히 잡아당긴다.

6) 혈액이 주사기 내로 수월하게 유입되어 와야 주사침이 정확히 심장에 삽입되었음이 확인된다. 따라서 심장에 들어가지 않은 경우에는 주사침을 빼고 처음부터 다시 같은 절차를 되풀이한다. 흉강 내에서는 주사침을 좌우로 움직이지 말고, 직선방향으로만 삽입해야 한다.

7) 필요한 혈액이 얻어지면 동물에서 주사바늘을 빼고 주사바늘을 떼어 혈액채취 시험관에 혈액을 넣는다.

◉ 주의사항

1) 흉부를 확실히 촉진하여 한번에 채혈을 하여야 한다.(한번에 채혈을 못할 경우 흉강에 손상이 감)

2) 채혈도중 마취에 깨어나지 않도록 한다.

<그림 3-5> 마우스의 심장채혈법

마. 목정맥채혈법(Jugular vein blood collection)

목정맥 채혈법은 동물을 희생시키지 않고 연속채혈이 가능하며, 꼬리정맥채혈시의 혈액학적 지표의 변화나 심장채혈시의 심장에 대한 영향등을 배제할 수 있어 가장 좋은 채혈법으로 알려져 있다.

◈ 마우스 및 랫드

◉ 준비물품

일회용 주사기(23G), 70% 알코올솜, 혈액채취 시험관

◉ 채혈방법

1) 검지는 경추부분에 위치한 상태에서 엄지를 랫드의 앞다리 사이로 넣어 쇄골 바로 윗 부분에 위치 시킨후 피부를 끌어 당기고 나머지 손으로 등쪽 피부를 잡아당겨 동물이 움직이지 못하도록 보정하면 <그림3-6>과 같이 채혈 부위가 잘 노출된다.

2) 목정맥을 확인한 후 주사침 부위에 70% 알콜솜을 문지른다.

3) 주사침을 흉근 근육을 통하여 삽입한다.

4) 쇄골의 흉골 쪽 기시부로부터 0.5 - 1 cm 떨어진 부위의 쇄골 바로 밑부분으로 주사침을 삽입하면 목정맥에 위치하게 된다.

5) 주사기 피스톤을 서서히 당겨 채혈한다.

6) 필요한 혈액량이 얻어지면 동물에서 주사바늘을 빼고 주사바늘을 떼어 혈액채취 시험관에 혈액을 넣는다.

◉ 주의사항

1) 주사침을 직접 정맥에 삽입 하면 혈종이 발생하므로 직접 정맥에 삽입하지 않는 것이 좋다.

<그림 3-6> 마우스의 목정맥 채혈

<표 3-1> 주요 동물의 채혈부위

Animal	Bleeding sites
Cat	Heart, cephalic vein, jugular vein
Cattle	Jugular vein
Dog	Cephalic vein, saphenous vein, femoral vein, jugular vein
Fish	Heart, anterior vena cava
Frog	Heart, orbital sinus
Gerbil	Heart
Goat	Jugular vein
Guinea pig	Heart, saphenous vein, ear vein,
Hamster	Heart, saphenous vein, femoral vein, jugular vein
Monkey	Cephalic vein, saphenous vein, femoral vein, jugular vein
Pigeon, chicken	Heart, anterior vena cava, wing vein
Rabbit	Heart, ear vein, orbital sinus
Rat, mouse	Heart, saphanous vein, tail vein, penile vein, sublingual vein
Sheep	Jugular vein
Snake	Heart, orbital sinus
Swine	Anterior vena cava
Turtle	Heart, anterior vena cava

<표 3-2> 주요 실험동물의 채혈부위와 채혈량

채혈부위	마우스	랫 드	기니픽	토 끼	개
미정맥 (부분)	0.03 - 0.05	0.3 - 0.5
배종족정맥 (부분)		0.1 - 0.3
안와정맥얼기 (전체)	0.5 - 0.8	3 - 5
귀정맥 (부분)			< 0.5	2 - 5
단두 (전체)	0.5 - 1	5 - 10
목정맥 (전체)	0.5 - 1	3 - 5	3 - 5	80 - 120	10 - 30
심장 (전체)	0.5 - 0.8	3 - 5	5 - 10	80 - 100
배대정맥 (전체)	0.5 - 1	2 - 4	3 - 5
배대동맥 (전체)	0.5 - 1	5 - 8	5 - 10
대퇴정맥 (부분)					5 - 10
요측피정맥 (부분)					2 - 10
복재정맥 (부분)					2 - 10