2015년도 2학기 실험동물의학 실습 강의자료
(마우스 부검법)
	실시일 :	2015년 11월 20일 ~
	작성자 :	충북대학교 실험동물연구지원센터

1. 부검 및 조직채취

(Autopsy & Tissue sampling)

동물로부터의 조직채취는 동물을 희생시킨 후 육안적인 검사에 이어 조직병리학적 검사를 위해 실시하는 경우가 대부분인데, 특정 육안 병변이 관찰된 경우에는 그 부위의 조직을 채취하지만, 뚜렷한 병변이 발견되지 않는 경우에는 동물마다 동일한 부위에서 채취하는 것을 원칙으로 한다. 이는 동일 장기 내에서도 병변분포가 다르게 나타날 수 있기 때문이다.

가. 절식

1) 절식시간은 동물종에 맞춰서 선택하는데, 비설치류에서는 24시간을 넘지 않는 범위에서의 절식을 권하고 있다.

2) 마우스처럼 대사속도가 빠른 동물종에서는 보다 단시간의 절식이 좋다. 일반적으로 마우스에서는 3 - 4시간의 절식으로 충분하다고 생각되고 있다.

나. 부검 전 외관검사

동물을 부검하기 전에 동물외부의 상태를 정확히 관찰하여 병리학적 진단에 도움을 주기 위하여 실시한다.

1) 일반상태: 예를 들면 초과 및 미달 체중, 쇠약의 정도, 이상 상태 없음 (No Gross Lesion, NGL)등을 표시한다.

2) 모발과 피부 상태: 예를 들면 미끈하고 광택이 나는 모발, 조악한 모발 상태, 모발의 숱이 적거나 반상 탈모 상태, 피부 표면의 병소와 위치, 필요시 준비된 도면에 부위 등을 표시한다.

3) 눈: 맑고 습윤함, 분비물을 보이는 염증성 점막, 혼탁 또는 불투명 상태 등을 표시한다.

4) 구강과 입술: 분홍빛으로 매끈하고 광택이 나는 상태, 궤양을 수반하였거나 수반하지 않은 염증 상태, 과도한 타액, 비정상적인 치아 등을 표시한다.

5) 코: 매끈하고 광택이 나는 상태, 건조한 상태, 가피형성, 염증 상태, 삼출물 상태 등을 표시한다.

6) 항문: 작고 분홍빛을 띠는 폐문 상태, 종창 상태, 염증 상태, 궤양 상태 및 분변이 회음부에 묻어 있는 상태 등을 표시한다.

7) 외부생식기: 수컷에서는 고환수의 정상 여부, 양쪽 고환크기의 비교, 정상적 크기의 포피, 분비물의 유무 등을, 암컷에서는 외음부 크기의 정상여부, 분비물의 유무, 발육이상 상태 등 정상 상태와 다른 비정상 상태들을 병리보고서에 기록한다.

다. 방혈

1) 장기를 적출하기 전 보통 방혈하는데, 복부의 정중선을 가위로 절개한 후 내부장기를 한쪽으로 젖힌다.

2) 배대정맥과 동맥을 노출시킨 후 옆으로 절개하여 충분히 방혈시킨다.

3) 방혈되는 혈액을 tissue 등으로 눌러 흡수시킨 후 장기나 조직이 너무 마르지 않도록 생리식염수를 자주 뿌려준다.

라. 육안검사

1) 계획에 없는 조기사망 동물은 가능한 한 빨리 부검되어야 하는데, 사망동물을 8시간 이상 냉장하면 장기에 손상이 오고, 냉동시켜서는 안 된다. 부검 중에 가능한 한 사망원인을 밝히도록 노력해야 한다.

2) 부검 중 자세하게 육안검사를 하여 모든 병변을 기록해야 한다.

3) 완벽한 육안검사는 신체의 모든 개구부를 포함하는 외모검사와 다음의 모든 기관과 조직이 빠짐없이 확인되어야 한다.

- Adrenal glands

- Brain

- Clitorial glands

- Esophagus

- Eyes

- Femur, including diaphysis with marrow cavity and epiphysis

- Gall bladder

- Gross lesions and regional lymph nodes

- Harderian gland

- Heart and aorta

- Intestine, large (cecum, colon, tectum)

- Intestine, small (duodenum, jejunum, ileum)

- Kidneys

- Lungs, bronchi and trachea

- Lymph nodes : mandibular and mesenteric lymph nodes

- Mammary gland with adjacent skin

- Muscle, thigh

- Nerve, sciatic

- Nose (nasal cavity and nasal turbinate)

- Oral cavity, larynx and pharynx

- Ovaries

- Pancreas

- Parathyroid glands

- Pituitary gland

- Preputial glands

- Prostate glands

- Salivary glands

- Seminal vesicles

- Skin

- Spinal cord

- Spleen

- Stomach (forestomach and glandular)

- Testes, epididymides

- Thymus

- Thyroid gland

- Tissue masses and regional lymph nodes

- Tongue

- Urinary bladder

- Uterus

- Vagina

- Zymbal glands

마. 부검절차(Autopsy procedures)

육안적으로 비정상적인 조직은 채취하여 부검소견서에 이러한 사항을 기록하여야 한다.

1) 사체를 부검판 위에 앙와자세로 뉘고 핀으로 고정시켜 알코올로 절개 예정부위를 적신다.

2) 턱에서부터 치골연까지 정중선을 따라 피부를 절개하고 피하조직으로부터 박리시킨다.

3) 흉근과 그 부위의 혈관을 절단하여 방혈시킨다. 방혈된 혈액을 탈지면 또는 솜으로 닦아낸다.

4) 경부에서 턱밑샘, 귀밑샘 및 국소 림프절 등을 노출시키고, 육안검사 후 좌측부터 적출하여 조직보관접시에 넣는다.

5) 복부 복면에서 피부와 젖샘(유선)을 함께 적출하여 육안검사 후 조직보관접시에 넣는다.

6) 검상연골에서부터 치골연까지 정중선을 따라 절개하여 복강을 연다. 마지막 늑골연을 따라서 좌․우 복벽을 절개한다.

7) 췌장과 비장을 적출하여 육안검사를 한 후 조직보관접시에 넣는다.

8) 비뇨생식기

- 수컷 : 음낭을 절개하여 고환을 노출시킨 다음 부고환 바로 윗부분에서 절단한다. 고환과 부고환을 적출하여 조직보관접시에 넣는다. 전립샘 바로 밑의 요도를 절단하여 전립샘과 방광을 함께 적출한다. 전립샘과 방광을 부드럽게 잡아당겨 분리시켜 각각 조직보관접시에 넣는다. 정낭을 적출하여 조직보관접시에 넣는다.

- 암컷 : 방광을 적출하여 조직보관접시에 넣는다. 자궁경관 밑의 질을 절단하여 자궁뿔과 난소를 격막과 지방조직으로부터 분리한다. 자궁뿔 바로 앞쪽으로 수란관을 절단한다. 자궁을 조직보관접시에 넣는다. 난소를 분리하여 난소낭을 제거시켜서 난소를 조직보관접시에 넣는다.

- 방광은 팽창된 상태로 고정되는 것이 바람직하므로, 수축된 빈 방광은 고정액을 넣어 부분 팽창시킨다.

9) 하더리안샘(Harderian gland)을 적출하여 번호를 표시한 카세트에 넣어서 분실되지 않도록 한다.

10) 부신과 신장을 분리하고 신장은 반분하여 고정시키기 전에 절단면을 관찰한다. 좌신은 종축으로, 우신은 횡측으로 절단하여 관찰하고 조직보관접시에 넣는다.

11) 소화기계

- 위의 분문부와 유문부 하단을 실로 각각 결찰한 후 유문과 십이지장의 경계에서 포르말린 2 ml을 주입한다 . 주입 1분 후 대만부를 따라 절개하여 위안의 내용물을 살피고 위점막도 자세히 관찰한다.

- 가위로 치골 결합부를 절단하여 직장을 가능한 한 뒤쪽으로 자른 후 가볍게 잡아당겨서 장관막을 분리시킨다.

- 장관막에서 장을 분리시킨다.

- 장관의 나머지 부분을 삭정할 때에는 열어서 검사한다. 병변이 있는 위치를 각각 확인한 다음 종이나 판에 핀으로 박아서 위치나 기타 정보를 명시하고 조직보관접시에 넣는다.

- 일반적으로 십이지장, 공장 및 회장으로부터 1.0 cm 정도의 길이로 조직을 떼어내어 조직보관접시에 넣는다.

- 맹장은 분리하여 열고, 생리식염수로 씻어서 조직보관접시에 넣는다.

- 결장을 육안 검사하며 필요시에는 장축을 따라 연다. 1.5 cm 정도의 길이로 잘라내어 조직보관접시에 넣는다. 가능하면 Peyer’s patch를 포함한다.

- 장간막 림프절을 적출하여 육안검사 후 조직보관접시에 넣는다. 간은 다른 장기와 연결된 부위로 절제하여 적출한 후 조직보관접시에 담고 외형과 색조로 관찰한다. 필요한 경우 단면을 내어 단면의 형태와 색깔 등을 관찰한다.

12) 검상연골은 유구겸자로 집어 치켜들어서 횡격막이 노출되게 한다. 횡격막을 관통하여 흉골로부터 양쪽으로 0.5-1.0 cm 떨어진 부위를 늑골을 따라 절단하며, 이때 가슴샘이 다치지 않도록 한다.

13) 혀와 후인두를 관찰하기 위하여 아래턱뼈을 제거한다. 후두 전연부에서부터 혀, 후두, 갑상샘, 부갑상샘, 기관, 식도, 심장 및 가슴샘을 분리시켜 흉강으로부터 한꺼번에 적출한다.

- 구강, 인두 및 후두부위를 육안으로 세밀하게 관찰한다.

- 가슴샘을 분리시켜 조직보관접시에 넣는다.

- 대동맥궁 부위에서 배대동맥을 절단한다. 대동맥궁을 떼어내어 조직보관 접시에 넣는다.

- 폐혈관을 잘라서 심장을 분리시킨다. 육안검사 후에 조직보관접시에 넣는다.

- 기관지 분지점 상단 5 mm 부위에서 기관을 자른다. 실험 프로토콜이 요구할 경우에는 기관을 열어서 육안검사를 한다. 적당 부분을 잘라서 조직보관접시에 넣는다.

- 식도 중간부위에서 0.5-1.0 cm 길이로 잘라내어 절단면을 관찰한 후 남은 식도를 열어서 검사하고 조직보관 접시에 넣는다.

- 폐장을 분리한다. 육안검사후 조직보관접시에 넣는다.

- 기관을 적출 할 때에는 갑상샘, 부갑상샘이 포함되도록 한다.

- 혀의 앞쪽 부위을 잘라서 육안검사후 조직보관접시에 넣는다.

14) 좌측 후지를 박피한다. 골격근과 좌골신경 일부를 적출하여 조직보관접시에 넣는다. 슬관절을 포함한 대퇴골을 적출하여 조직보관접시에 넣는다.

15) 중추신경계

- 두개골 기저부와 경부 배면으로부터 골격근을 제거한 후 관절구와 환추가 노출되게 한다. 두부를 손가락으로 구부려서 대공과 환추 접합부에서 척추를 자른다. 두개골은 걸겸자로 조심스럽게 잘라내어 뇌척수막과 뇌를 노출시킨다. 뇌수막을 제거한다. 엄지와 가운데 손가락으로 머리를 잡고 연수를 젖혀서 뇌신경을 노출시킨다. 두개골에서 가까운 부위에서 뇌신경을 차례로 절단하여 손으로 뇌를 받는다. 이 뇌를 조직보관접시에 넣는다. 후각신경엽은 특별 요구시에만 적출한다.

- 예리한 칼로 뇌하수체를 덮고 있는 가는 막을 벗기고 두개강저로부터 뇌하수체를 적출한다. 이 때 뇌하수체는 칼끝으로 들어 올려서 조직보관접시에 넣는다.

- 흉복부의 척추를 약 1.0 cm 길이로 잘라낸다. 신경궁을 절취하여 노출된 척수를 조직보관접시에 넣는다.